交聯(lián)方法

將RNA固定在膜上有兩種常用方法：烘焙或者紫外線交聯(lián)。傳統(tǒng)方法是將膜在80℃的烤箱中烘烤2小時(shí)，這種方法的缺點(diǎn)顯而易見，耗時(shí)長且效率低。于是，更多的生物實(shí)驗(yàn)室開始使用紫外交聯(lián)儀進(jìn)行RNA的膜交聯(lián)。相比傳統(tǒng)的烘焙法，使用紫外交聯(lián)儀僅需在254nm紫外光下照射幾秒種即可，大大提高了實(shí)驗(yàn)效率！

一、傳統(tǒng)烘焙法

烘烤的原理是加熱膜以除去所有溶解RNA的水。RNA 的一個(gè)重要組成部分是其疏水性核苷酸堿基，它與膜上的芳香族基團(tuán)進(jìn)行疏水性接觸。這種相互作用會受到在80°C烘箱中加熱15分鐘的影響。

這種傳統(tǒng)方法耗時(shí)長，效率低。另外，如果不調(diào)節(jié)熱量從而使溫度升高至100°C，膜可能會損壞。因此，我們更推薦使用高效便捷智能的紫外交聯(lián)法。

二、紫外線交聯(lián)方法

短波紫外線使RNA中的含氮堿基（主要是尿嘧啶）變得高度活躍，并與膜表面的胺基形成共價(jià)鍵。潮濕的膜需要大約0.12J/cm2的紫外線照射量。析浦紫外交聯(lián)儀XEPU-1208和XEPU-1215系列在出廠時(shí)均提供一個(gè)默認(rèn)設(shè)置為0.12J/cm2的紫外線劑量，您可以一鍵使用這個(gè)默認(rèn)值，實(shí)現(xiàn)“自動(dòng)交聯(lián)”功能。在操作時(shí)，注意不要將RNA暴露在紫外線下過少或過度，這兩種情況都會降低雜交信號。我們建議，用析浦短波254nm紫外交聯(lián)儀曝光一分鐘，或用析浦中波302nm紫外交聯(lián)儀曝光三分鐘。您可以根據(jù)需要，自行設(shè)定照射能量或時(shí)間。

通過紫外線將RNA快速交聯(lián)到膜上的實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 首先，制備具有5個(gè)相同泳道的凝膠，每個(gè)泳道包含1μg RNA。跑膠并將其轉(zhuǎn)移到膜上。

2. 然后，將膜切成相同的條，每條包含一條泳道。將它們單獨(dú)包裹在單層塑料膜中。

3. 將析浦紫外交聯(lián)儀在干凈干燥的水平面放置，并插上電源線。

4. 請務(wù)必做好紫外防護(hù)措施。

5. 打開析浦紫外交聯(lián)儀的艙門，將條帶放進(jìn)析浦紫外交聯(lián)儀的輻照室內(nèi)，關(guān)閉艙門。

6. 根據(jù)析浦科學(xué)儀器為您提供的操作指南，選取對應(yīng)的操作模式，并在鍵盤上輸入您需要的能量或時(shí)間值。

7. 按下開始鍵，析浦紫外交聯(lián)儀將啟動(dòng)照射，顯示屏開始倒計(jì)時(shí)。

8. 照射結(jié)束時(shí)，您會聽到蜂鳴提醒，儀器將自動(dòng)進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)。

9. 打開艙門，取出樣品，關(guān)閉艙門。

10. 使用完析浦紫外交聯(lián)儀后，請務(wù)必?cái)嚅_電源。

析浦254nm短波8瓦紫外交聯(lián)儀XEPU-1208：XEPU-1208析浦短波254nm紫外交聯(lián)儀

析浦254nm短波15瓦紫外交聯(lián)儀XEPU-1215：XEPU-1215析浦短波254nm紫外交聯(lián)儀

下圖：析浦254nm短波15瓦紫外交聯(lián)儀XEPU-1215