發(fā)布時(shí)間:2023-08-03 21:17:09 人氣:3544 來源:析浦科學(xué)儀器
ZsGreen熒光蛋白是1999年發(fā)表的一種堿性(本構(gòu)熒光)綠色熒光蛋白,來源于Zoanthus sp.。ZsGreen熒光蛋白激發(fā)波長(EX)是496nm,發(fā)射波(EM)是506nm。ZsGreen熒光蛋白是用藍(lán)光激發(fā),發(fā)出綠色熒光。
ZsGreen1且在505納米處具有發(fā)射峰的珊瑚礁珊瑚蛋白已被引入,以替代增強(qiáng)型綠色熒光蛋白。當(dāng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)時(shí),ZsGreen1相對(duì)于EGFP明亮,但在產(chǎn)生融合突變體方面的作用有限,并且與其他珊瑚礁蛋白類似,具有形成四聚體的趨勢。
ZsGreen is a basic (constitutively fluorescent) green fluorescent protein published in 1999, derived from Zoanthus sp..
ZsGreen熒光蛋白的激發(fā)光波長和發(fā)射光波長的光譜圖
由上圖可以看出,ZsGreen熒光蛋白和GFP、eGFP的激發(fā)光波長是一樣的,所以,zsgreen可以用gfp的光激發(fā),ZsGreen熒光蛋白和GFP、eGFP的區(qū)別是ZsGreen熒光更亮。
上圖:GFP在煙草葉片上的表達(dá)
野生型綠色熒光蛋白wtGFP
野生型GFP(wild type GFP, wtGFP)從一開始就引起了人們極大的興趣,而且被用作新型的簡單報(bào)告基因及體內(nèi)標(biāo)記,但GFP在異源生物體中的表達(dá)并非那么簡單。例如,研究人員很早就發(fā)現(xiàn)需要在較高的溫度下孵育才能在細(xì)胞或生物體中表達(dá)GFP,并且wtGFP在37℃的熱穩(wěn)定性差。這些都阻礙了它在轉(zhuǎn)基因中的應(yīng)用。這些難題促使人們進(jìn)一步篩選分離wtGFP的變體?,F(xiàn)在,人們已經(jīng)找到了熒光強(qiáng)度更強(qiáng)且更耐熱的變體。這些變體多數(shù)為經(jīng)突變的脫輔基蛋白,它們可防止高溫導(dǎo)致的錯(cuò)誤折疊。近年來出現(xiàn)的新型wtGFP基因突變體的激發(fā)和發(fā)射譜發(fā)生了改變,熱穩(wěn)定性和熒光強(qiáng)度得到了提高,GFP報(bào)告基因在小鼠中的應(yīng)用就是以這些變體作為基礎(chǔ)的。
上圖為:wtGFP的激發(fā)光發(fā)射光光譜圖
增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)
現(xiàn)在,應(yīng)用最為廣泛的是紅移變體增強(qiáng)型GFP(EGFP)。諸如EGFP這些紅移變體的更大激發(fā)峰發(fā)生紅向移動(dòng),大約為490nm,這一波長也恰好是多數(shù)分光設(shè)備、流式細(xì)胞儀及共聚焦顯微鏡的常用波長。EGFP有兩個(gè)氨基酸突變,當(dāng)被藍(lán)光激發(fā)時(shí),它發(fā)出的熒光要比wtGFP亮30-40倍。wtGFP和包括EGFP在內(nèi)的多數(shù)變體半衰期長,所以不適合追蹤表達(dá)的減少或損耗。
上圖為:eGFP的激發(fā)光發(fā)射光光譜圖
由上圖可以看出來,wtGFP、avGFP的主要激發(fā)波長在紫外線波段,所以,用紫外線燈能夠觀察到GFP的熒光,但如果是增強(qiáng)型的綠色熒光蛋白,如egfp、mGFP、ZsGreen,用紫外線是無法激發(fā)出熒光的,必須用析浦科學(xué)的488nm的藍(lán)光手電筒才可以激發(fā)。所以,在觀察綠色熒光蛋白之前,必須先搞清楚是哪種熒光蛋白,再選擇具體合適的熒光手電筒。
如果要觀察綠色熒光蛋白(GFP、eGFP、avGFP、ZsGreen)的表達(dá),析浦科學(xué)儀器公司生產(chǎn)的便攜式熒光蛋白激發(fā)光源可以選擇GFPfinder-2101RB和GFPfinder-2102RG系列雙波長熒光蛋白激發(fā)光源。綠色熒光蛋白采用析浦科學(xué)儀器公司的藍(lán)光手電筒激發(fā),佩戴LUV-30A黃色觀察眼鏡觀察,如希望提供更多詳細(xì)信息,可直接聯(lián)系析浦.
上圖為GFPfinder-2101熒光手電筒
析浦(上海)科學(xué)儀器有限公司是專業(yè)從事實(shí)驗(yàn)室科學(xué)儀器自主研發(fā)、生產(chǎn)、銷售和服務(wù)一體的企業(yè),擁有專業(yè)的產(chǎn)品研發(fā)人員和銷售服務(wù)團(tuán)隊(duì)。公司主營實(shí)驗(yàn)儀器有紫外交聯(lián)儀、紫外透射儀、藍(lán)光透射儀、紫外燈、旋渦混合器、紫外光源等,公司研發(fā)多種款式光源,誠征各省市分銷商。