PCR假陽性

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (polymerase chain reaction，PCR) 是體外酶促擴(kuò)增DNA特定片段的常用工具。PCR經(jīng)常被使用，因?yàn)樗菣z測稀有序列時一個非常靈敏的檢測方法。然而，這種靈敏度意味著，即使是一個細(xì)胞的DNA污染也會干擾測定結(jié)果，產(chǎn)生陽性信號。PCR假陽性源于外源基因組、質(zhì)?；騊CR產(chǎn)物的污染。這是目前使用PCR作為常規(guī)診斷方法的主要限制。

通過紫外交聯(lián)儀的紫外照射消除PCR污染

實(shí)驗(yàn)人員研究了很多消除PCR污染的方法，其中常用的是通過將PCR試劑暴露在紫外線下，滅活污染的DNA，從而提供消除假陽性反應(yīng)的機(jī)會。紫外交聯(lián)儀作為一臺智能可控的紫外輻照設(shè)備，是您消除PRC污染的好選擇！

紫外照射可以應(yīng)用于檢測人類巨細(xì)胞病毒 (CMV) 和人類免疫缺陷病毒 (HIV) 的PCR系統(tǒng)，并被證明可以有效消除實(shí)驗(yàn)室遇到的污染以及在UV之前添加到PCR系統(tǒng)中的質(zhì)粒 DNA（低于100pg）。PCR 系統(tǒng)擴(kuò)增HIV-1長末端重復(fù) (LTR) 序列的靈敏度不會受紫外輻照的影響。然而，PCR 系統(tǒng)擴(kuò)增CMV基因組早期基因啟動子序列的最終靈敏度降低了1000倍。通過32P標(biāo)記的放大器的鏈分離聚丙烯酰胺凝膠電泳測定，UV照射不會影響PCR產(chǎn)物的大小。因此，只要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定每個PCR系統(tǒng)對靈敏度的影響，簡單的預(yù)暴露于紫外光是值得納入PCR方案的一步。

DNA的紫外線照射會導(dǎo)致嘧啶二聚體的形成，從而阻止它們成為后續(xù)PCR中的有效模板。通過析浦紫外交聯(lián)儀的紫外線照射，可以將聚丙烯微量離心管中的HIV DNA模板減少1000倍以上。引物的靈敏度取決于序列和濃度。具有相鄰胸腺嘧啶堿基的寡核苷酸比沒有的寡核苷酸更容易受到紫外線的影響。Taq聚合酶對紫外線高度敏感，而脫氧核苷酸三磷酸相對抗紫外線。

紫外交聯(lián)儀選型

析浦紫外交聯(lián)儀XEPU-1215標(biāo)配6根15瓦紫外燈管：紫外交聯(lián)儀XEPU-1215產(chǎn)品介紹

析浦紫外交聯(lián)儀XEPU-1208標(biāo)配6根8瓦紫外燈管：紫外交聯(lián)儀XEPU-1208產(chǎn)品介紹

析浦自主研發(fā)生產(chǎn)的紫外交聯(lián)儀均內(nèi)置紫外傳感器，并通過微處理器控制，實(shí)現(xiàn)可控的紫外能量或時間照射，是您消除PCR污染的好選擇！析浦科學(xué)儀器為終端用戶提供免費(fèi)試用！

Reference: Eliminating PCR contamination: is UV irradiation the answer?