GFP綠色熒光蛋白激發(fā)原理

綠色熒光蛋白GFP是個被發(fā)現(xiàn)的熒光蛋白，來源于水母Aequorea victoria。GFP分子量約為27kDa，是一個由238個氨基酸組成的單鏈多肽。更大激發(fā)波長395nm，發(fā)射峰509nm，并且在470nm處有一個肩峰。其化學性質(zhì)穩(wěn)定，作為熒光標記廣泛應用于生物醫(yī)學研究。

其發(fā)色團由65至67位的三個氨基酸（Ser-Tyr-Gly）殘基組成，包裹在一個β折疊形成的桶裝結(jié)構(gòu)中。當?shù)鞍踪|(zhì)鏈折疊時，這段被深埋在蛋白質(zhì)內(nèi)部的氨基酸片段經(jīng)環(huán)化，脫水形成咪唑酮。在分子氧存在的條件下，發(fā)色團可進一步發(fā)生氧化脫氫，最終形成熒光。簡單來講，66位酪氨酸的六元苯環(huán)與蛋白質(zhì)主鏈環(huán)化形成的雙環(huán)共軛結(jié)構(gòu)可以發(fā)光。395nm（紫外）和475nm（藍光）是綠色熒光蛋白兩個更大激發(fā)波長，使用其中的一種激發(fā)光源激發(fā)GFP，就可使其發(fā)出綠光（發(fā)射波長在509nm）。推薦使用熒光手電筒XEPU-2101GFP來觀察GFP的表達。

GFP熒光極其穩(wěn)定，在激發(fā)光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素強，特別是在450～490nm藍光波長下更穩(wěn)定。類似的，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高，抗光漂白能力強，因此更適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應底物，因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白，其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。但因為GFP不是酶，熒光信號沒有酶學放大效果，因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白，比如熒光蛋白的應用非常的廣泛，已經(jīng)應用于分子標記，體內(nèi)示蹤，信號轉(zhuǎn)導，藥物篩選等生物科研的各個方面熒光讓我們能夠檢測分子的構(gòu)象變化，也能讓我們追蹤化學反應.... 是科學研究的重要手段之一。與熒光相似，生物發(fā)光也常用在實驗室中。與熒光不同，生物發(fā)光不需要激發(fā)光照射。

GFP熒光激發(fā)光源

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