腺相關(guān)病毒AAV

腺相關(guān)病毒（Adeno-associated virus，AAV）是目前發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)最簡單的、無包膜的單鏈DNA病毒，病毒基因組長約有4.7Kb，屬于細(xì)小病毒家族。腺相關(guān)病毒（AAV）因其能長期表達、毒性低、免疫原性低、組織特異性高等優(yōu)勢，已成為基因治療領(lǐng)域最重要的基因載體之一。

北京大學(xué)第三眼科的胡雙和楊麗萍在2020年發(fā)表的文獻“不同血清型腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠視網(wǎng)膜后的表達效率”中，以綠色熒光蛋白(green fluorescent protein, GFP)作為標(biāo)記, 觀察不同AAV血清型載體介導(dǎo)的視網(wǎng)膜基因表達。實驗中，選取視網(wǎng)膜疾病基因治療中常用的AAV2/2、AAV2/5、AAV2/8和AAV2/9四種血清型AAV載體，并以綠色熒光蛋白作為報告基因，用GFP的表達強度判斷AAV載體介導(dǎo)的外源基因在視網(wǎng)膜中的表達效率。實驗結(jié)果表明，AAV2/8和AAV2/9在小鼠視網(wǎng)膜的GFP綠色熒光明顯，說明這兩種AAV載體轉(zhuǎn)染小鼠視網(wǎng)膜后的表達效率高，而在這兩種血清型中，AAV2/8的GFP綠色熒光主要集中在感光細(xì)胞內(nèi)，AAV2/9在視網(wǎng)膜全層均有表達，說明AAV2/8對視網(wǎng)膜感光細(xì)胞特異性更強。詳見下圖：小鼠視網(wǎng)膜下腔注射不同血清型AAV病毒載體后2周的免疫熒光染色 Expression of GFP reporter gene in different AAV serotype in mouse retina.

觀察AAV轉(zhuǎn)染小鼠的GFP熒光

野生型綠色熒光蛋白GFP有兩個激發(fā)光峰值，分別在395nm（長波紫外線UV-A）和475nm（藍(lán)光）。觀察AAV轉(zhuǎn)染小鼠的GFP綠色熒光時，一個經(jīng)濟便攜的方式是為現(xiàn)有的體視顯微鏡增加一個外部激發(fā)光，可替代昂貴的熒光顯微鏡，用于GFP熒光觀察。

GFP熒光手電筒GFPfinder-2101RB可搭配支架，適配各種型號的體視顯微鏡，作為一個外部激發(fā)光，用于激發(fā)觀察AAV轉(zhuǎn)染小鼠的GFP綠色熒光。

下圖：適配體視顯微鏡的GFP熒光手電筒GFPfinder-2101RB

Reference: Hu S, Yang LP. [Expression pattern of different serotypes of adeno-associated viral vectors in mouse retina]. Beijing Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2020 Oct 18;52(5):845-850. Chinese. doi: 10.19723/j.issn.1671-167X.2020.05.008. PMID: 33047717; PMCID: PMC7653430.