凝膠電泳(gel electrophoresis)是什么?

假設(shè)你剛剛做了一個(gè)PCR反應(yīng)，復(fù)制了許多目標(biāo)DNA?；蛘吣阋呀?jīng)做了一些DNA克隆，試圖將基因復(fù)制到圓形DNA質(zhì)粒中?，F(xiàn)在，你想檢查你的PCR是否有效，或者你的質(zhì)粒中是否有正確的基因。如何直接觀察DNA片段？

凝膠電泳（gel electrophoresis）是一個(gè)好選擇！凝膠電泳是一種電泳形式，在分子生物學(xué)中常用于核酸（DNA/RNA）分子的分離、純化和鑒定。凝膠電泳是一種用于根據(jù)DNA/RNA分子大小和電荷分離DNA/RNA片段的技術(shù)。根據(jù)分子的大小和電荷，分子將以不同的方向或不同的速度穿過(guò)凝膠，從而使它們相互分離。

所有的DNA分子每單位質(zhì)量都有相同的電荷量。所以，DNA片段的大小決定了它們的移動(dòng)速度。通過(guò)凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，我們可以直接觀察到樣本中存在多少不同的DNA片段，以及它們相對(duì)于彼此的大小。我們還可以把已知大小的DNA片段當(dāng)成“標(biāo)尺”在一旁，來(lái)確定一段DNA的大小。

什么是瓊脂糖(Agarose)？

用于DNA分離的凝膠通常由一種名為瓊脂糖的多糖制成，這種多糖呈干燥的粉末狀薄片。

瓊脂Agar是從紅藻中獲得的凝膠狀物質(zhì)，從中進(jìn)一步純化得到瓊脂糖。瓊脂糖不帶電荷，具有親水性，對(duì)敏感的生物大分子極少引起變性和吸附，是理想的惰性載體。常在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，作為電泳、層析等技術(shù)中的半固體支持物，用于分子的分離和分析。

瓊脂糖在凝膠中的百分比影響了孔隙的大小，從而影響了可能通過(guò)的分子的大小以及通過(guò)的速度。瓊脂糖的百分比越高，孔徑越小，因此能夠通過(guò)的分子越小，通過(guò)速度越慢。所以，高濃度瓊脂糖用于小分子的分離，低濃度瓊脂糖用于大分子的分離。瓊脂糖凝膠是根據(jù)質(zhì)量體積比來(lái)制備的。1克瓊脂糖和100毫升電泳緩沖液可以制備1%的瓊脂糖凝膠。（1g agarose/100ml buffer = 1% gel）。在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，0.7~1%的瓊脂糖凝膠通常用于日常的DNA分離，對(duì)0.2~10kb范圍內(nèi)的片段提供清晰的區(qū)分。

使用析浦紫外透射臺(tái)XEPU-1126觀察DNA/RNA片段

DNA/RNA片段被分離后，我們就可以檢查凝膠上面的條帶。由于DNA肉眼不可見(jiàn)，在制備瓊脂糖凝膠時(shí)，會(huì)加入溴化乙錠（Ethidium Bromide）進(jìn)行DNA染色。溴化乙錠是一種芳香族化合物，能夠嵌入DNA的相鄰的堿基之間，形成一種絡(luò)合物。把染色后的凝膠放置在析浦紫外透射臺(tái)XEPU-1126上，在紫外線照射下時(shí)，DNA片段會(huì)發(fā)出橘黃色的熒光，使我們能夠看到凝膠上不同位置的DNA。

凝膠上一條定義明確的DNA“線”被稱為帶。每條帶都包含大量相同大小的DNA片段，這些片段都作為一個(gè)群體到達(dá)了相同的位置。單個(gè)DNA片段（甚至是一小群DNA片段）在凝膠上是看不見(jiàn)的。通過(guò)將樣本中的條帶與DNA ladder進(jìn)行比較，我們可以確定它們的大致大小。

析浦紫外透射臺(tái)XEPU-1126

析浦紫外透射臺(tái)是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的常用設(shè)備，主要用于核酸（DNA/RNA）凝膠電泳實(shí)驗(yàn)中的觀測(cè)和切膠。紫外透射臺(tái)也可用于測(cè)定PCR產(chǎn)物的大小、在限制性內(nèi)切酶消化后純化DNA片段、定量DNA或在提取后驗(yàn)證RNA完整性。析浦紫外透射臺(tái)XEPU-1126是您凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的好助手！

1. 析浦紫外透射儀XEPU-1126系列可選365nm，302nm或254nm的UV燈管。

2. 均勻透照：優(yōu)質(zhì)紫外燈管提供亮度均勻、強(qiáng)度高的紫外光照，即使是微量DNA也可觀測(cè)到。

3. 光強(qiáng)度可調(diào)：10%-99%自由調(diào)節(jié)。

4. 操作方便：能以任意角度調(diào)節(jié)紫外防護(hù)板，使觀測(cè)和切膠更方便。

5. 安全設(shè)計(jì)：透明紫外防護(hù)板，可保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員免于紫外線的傷害。

6. 散熱設(shè)計(jì)：內(nèi)含風(fēng)扇冷卻裝置幫助散熱。

下圖是析浦紫外透射臺(tái)XEPU-1126

析浦藍(lán)光切膠儀XEPU-1126B

析浦雙LED藍(lán)白光透射儀XEPU-1126B，又稱藍(lán)光切膠儀、藍(lán)光透射臺(tái)或藍(lán)白光透射儀?？捎糜诤怂幔―NA/RNA）凝膠電泳的觀察和切膠，適用于新型無(wú)毒DNA染料，避免了溴化乙錠染料對(duì)人體的傷害，同時(shí)大大降低了紫外線對(duì)樣本的損傷。一鍵切換藍(lán)白光源，操作簡(jiǎn)單，一機(jī)多用！是您的切膠好助手！

1. 藍(lán)光LED：適用于熒光染色的核酸和蛋白質(zhì)凝膠 (fluorescently stained nucleic acid and protein gels)

2. 白色LED：適用于比色染色的蛋白質(zhì)凝膠和生色染色膜 (colorimetric stained protein gels and chromogenically stained membranes)

下圖是析浦藍(lán)光切膠儀XEPU-1126B