綠色熒光蛋白GFP在植物中的應(yīng)用

綠色熒光蛋白（green fluorescent protein, GFP）可作為多種活植物細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因植物中的報(bào)告基因。GFP因其多功能且靈敏的特性，正越來越多地應(yīng)用于植物生物學(xué)中。應(yīng)用于細(xì)胞上時(shí)，GFP被用作體內(nèi)報(bào)告基因來評(píng)估瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的頻率。GFP也被證明是監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)運(yùn)輸和亞細(xì)胞定位的理想工具。具有更強(qiáng)大折疊特性的更明亮的GFP突變體的開發(fā)使得整個(gè)葉子和植物中的GFP能夠更好地宏觀可視化。一個(gè)有趣的例子是使用GFP來監(jiān)測(cè)病毒在整個(gè)植物內(nèi)部和植物之間的移動(dòng)。GFP也正在成為監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)基因運(yùn)動(dòng)和田間轉(zhuǎn)基因植物的強(qiáng)大工具。GFP是一個(gè)真正可用于整個(gè)植物的體內(nèi)報(bào)告系統(tǒng)。隨著更多GFP基因變體的出現(xiàn)，GFP的用途將進(jìn)一步增加。

有研究表明，重新設(shè)計(jì)的GFP基因序列與高表達(dá)的人類蛋白質(zhì)的密碼子相比，在玉米葉細(xì)胞中的GFP表達(dá)量比原始水母GFP序列高20倍。當(dāng)與生色團(tuán)突變相結(jié)合時(shí)，新的GFP序列在490nm藍(lán)光激發(fā)下可產(chǎn)生100倍以上的明亮熒光信號(hào)，并且生色團(tuán)形成速度更快。不需要外源底物、輔因子或其他基因產(chǎn)物。GFP在植物細(xì)胞中非常穩(wěn)定，幾乎沒有光漂白現(xiàn)象。基于GFP的熒光激活細(xì)胞分選后即可獲得活細(xì)胞。

這種修飾的GFP在各種瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)中具有廣泛的用途，并且可以輕松檢測(cè)弱啟動(dòng)子活性，可視化靶向細(xì)胞核和各種質(zhì)體的蛋白質(zhì)，分析活體單細(xì)胞和體內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，以及高等植物轉(zhuǎn)基因活細(xì)胞和組織中的許多其他應(yīng)用。GFP作為新的報(bào)告基因可用于監(jiān)測(cè)高等植物中的基因表達(dá)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、共轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)化、蛋白質(zhì)運(yùn)輸和定位、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、細(xì)胞分離和純化以及細(xì)胞譜系。

檢測(cè)綠色熒光蛋白GFP的熒光表達(dá)

綠色熒光蛋白GFP在特定波長(zhǎng)的光線（通常是藍(lán)光440-460nm或紫外光365nm）激發(fā)下，會(huì)發(fā)出明亮熒光。

析浦科學(xué)儀器專業(yè)生產(chǎn)熒光蛋白激發(fā)光源：熒光手電筒GFPfinder-2101, 熒光蛋白觀察箱GFPfinder-2106, 三色熒光蛋白激發(fā)光源GFPfinder-2103。多種激發(fā)光波長(zhǎng)可選，可激發(fā)各種熒光蛋白或熒光發(fā)色團(tuán)。無需顯微鏡，直接照射GFP樣本，就可以觀察熒光表達(dá)，高效靈敏！

下圖：GFPfinder-2106熒光蛋白激發(fā)光源，搭配便攜式觀察暗箱，可輕松觀察種子、愈傷組織、葉片等植物樣本的GFP熒光！