利用綠色熒光蛋白GFP進(jìn)行轉(zhuǎn)基因植株檢測

綠色熒光蛋白GFP和紅色熒光蛋白RFP作為報告分子被廣泛地運用在轉(zhuǎn)基因植株檢測中。在植物的轉(zhuǎn)基因遺傳轉(zhuǎn)化過程中，利用綠色熒光蛋白（GFP, EGFP）或者紅色熒光蛋白RFP作為標(biāo)簽蛋白，能夠在早期愈傷階段輔助篩選鑒定陽性轉(zhuǎn)化的愈傷組織，并篩選出有熒光的陽性轉(zhuǎn)化愈傷組織進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)。

作為報告分子，綠色熒光蛋白GFP在植物中主要有2個作用：監(jiān)測基因的表達(dá)和蛋白質(zhì)的定位。作為轉(zhuǎn)基因植株的報告分子，綠色熒光蛋白GFP的一個顯著優(yōu)點是，在不破環(huán)細(xì)胞和化學(xué)染色的情況下直接成像，檢測極為方便。此外，如果轉(zhuǎn)基因植物中有較高水平的GFP轉(zhuǎn)錄本時，可直接使用長波365nm紫外燈GFPfinder-2101UV或藍(lán)光手電筒GFPfinder-2101RB進(jìn)行照射，利用GFP發(fā)綠色熒光的現(xiàn)象進(jìn)行檢測。

綠色熒光蛋白GFP熒光檢測的缺點就是沒有放大作用，它不能像酶一樣通過加工無數(shù)的底物分子而將信號放大。所以一般都需強(qiáng)啟動子以驅(qū)動綠色熒光蛋白GFP基因在細(xì)胞內(nèi)足量的表達(dá)。

綠色熒光蛋白GFP在轉(zhuǎn)基因中的應(yīng)用需要滿足3個條件:

1. 在植物細(xì)胞中，必須要有足夠的轉(zhuǎn)錄本才能觀測到綠色熒光蛋白GFP的熒光現(xiàn)象。

2. 綠色熒光蛋白GFP必須經(jīng)過合適的轉(zhuǎn)錄后修飾才能產(chǎn)生成熟的綠色熒光蛋白GFP。

3. 綠色熒光蛋白GFP需要定位在合適的位置，才能發(fā)生轉(zhuǎn)錄過程，從而進(jìn)行適量的積累來便捷地檢測表達(dá)細(xì)胞。

利用綠色熒光蛋白GFP進(jìn)行轉(zhuǎn)基因植株檢測時，需要注意幾個方面的問題：

1. 首先，綠色熒光蛋白GFP的表達(dá)水平受多種因素的影響。很明顯高基因拷貝數(shù)和強(qiáng)啟動子/增強(qiáng)子有利于轉(zhuǎn)錄和翻譯。一般都需強(qiáng)啟動子以驅(qū)動綠色熒光蛋白GFP基因在細(xì)胞內(nèi)足量表達(dá)。

2. 其次，不同的植物組織發(fā)綠色熒光的情況不同，選擇實驗操作步驟相同、且同一時期的轉(zhuǎn)基因植株作比較，對于綠色熒光蛋白GFP的檢測非常重要。

用于轉(zhuǎn)基因植株熒光檢測的GFP手電筒

GFPfinder-2101熒光手電筒是一款便攜的熒光蛋白檢測光源，可用于激發(fā)和檢測各種常見的熒光蛋白，如綠色熒光蛋白GFP，紅色熒光蛋白RFP和黃色熒光蛋白YFP等。GFPfinder-2101熒光手電筒小巧便攜，可在實驗室檢測，也可帶入野外檢測，無需采摘葉片。

用GFPfinder-2101照射樣本，肉眼可直接觀察熒光，實時對陽性和陰性的轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行篩選。

下圖：GFPfinder-2101RB熒光手電筒套裝（激發(fā)光波長450nm），可用于檢測含綠色熒光蛋白GFP的轉(zhuǎn)基因植株

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