Hoechst染料的特性

Hoechst染料是一種用于DNA染色的藍色熒光核酸染料。Hoechst染料可滲透細胞，具有多種應(yīng)用，例如自動DNA測定和染色體分選。Hoechst染料是有用的活體染色劑，可用于流式細胞術(shù)識別DNA損傷，以及通過監(jiān)測染料的發(fā)射光譜變化進行其他活力測量。Hoechst染料由Hoechst AG開發(fā)，該公司對其所有化合物進行了編號，因此染料Hoechst 33342是該公司生產(chǎn)的第33,342個化合物。另外三種相關(guān)的Hoechst染料是Hoechst 33258、Hoechst 33342和Hoechst 34580。染料Hoechst 33258 和 Hoechst 33342是常用的染料，它們具有相似的激發(fā)和發(fā)射光譜。Hoechst 33258的水溶性比Hoechst 33342稍高，但兩者均已廣泛用于活細胞染色。

Hoechst染料的應(yīng)用

0.1–12 μg/ml濃度的Hoechst染料通常用于對細菌或真核細胞中的DNA進行染色。細胞在室溫或37°C下染色1-30 分鐘，然后洗滌以去除未結(jié)合的染料。Hoechst 染料通常用作DAPI核酸染料的替代品。

Hoechst染料和DAPI之間的主要區(qū)別是：

1. Hoechst染料的毒性低于DAPI，使染色細胞具有更高的活力。

2. 某些Hoechst染料（Hoechst 33342）中額外的乙基使它們更具細胞滲透性。

Hoechst染料通常在以下應(yīng)用中對基因組DNA進行染色：

1. 熒光顯微鏡和免疫組織化學(xué)（通常與其他熒光團一起使用）Fluorescence microscopy and immunohistochemistry

2. 流式細胞術(shù)用于計數(shù)或分選細胞（例如，使用Hoechst染料來分析群體中有多少細胞處于細胞周期的哪個階段）Flow cytometry to count or sort out cells

3. 在瓊脂糖凝膠中檢測存在RNA的DNA Detecting DNA in the presence of RNA in agarose gels

4. 自動DNA測定 Automated DNA determination

5. 染色體分選 Chromosome sorting

Hoechst的激發(fā)光和發(fā)射光

Hoechst 33258染料在352nm紫外光激發(fā)下發(fā)出藍青色熒光，發(fā)射光峰值在461nm附近。

Hoechst 34580染料可以被392nm光激發(fā)出熒光，發(fā)射光峰值在440nm附近。

Hoechst染料可溶于水和有機溶劑，如二甲基甲酰胺或二甲亞砜。Hoechst染料的熒光強度也會隨著溶劑pH值的增加而增加。

下圖是Hoechst染料的激發(fā)發(fā)射光譜。

析浦科學(xué)儀器自主研發(fā)的GFPfinder-2101UV激發(fā)光峰值是365nm紫外光，可以激發(fā)Hoechst染料發(fā)出熒光。GFPfinder-2101UV配有4顆大功率LED，照射面積大且強度高，照射樣本后直接通過肉眼就可以觀察熒光。同時提供一副透明的紫外線防護眼鏡，既可保護實驗人員免受紫外線傷害，又不影響觀測熒光。

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